Para médicos

El diagnóstico de la infertilidad masculina se basa en la evaluación convencional del análisis de semen, que se basa en los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS 6). Sin embargo, un número creciente de estudios ha destacado los problemas asociados con esta metodología debido a la falta de umbrales de parámetros de semen predictivos y validados para el éxito de la tecnología de reproducción asistida. (van derSteeg et al., 2011; van Weert et al., 2008). El análisis convencional del semen examina las características de la función del espermatozoide, pero no aborda completamente la competencia funcional de los espermatozoides. Actualmente, en la determinación de la competencia espermática se atribuye un papel fundamental a la integridad del ADN. Se recomiendan fuertemente nuevas pruebas para analizar la fragmentación del ADN espermático (Shamsi et al., 2011).

La fragmentación del ADNdel esperma es una de las causas paternas más importantes de fracasos reproductivos repetidos. Alrededor del 20-30% de los hombres que visitan una clínica de fertilidad tienen un nivel de fragmentación del ADN espermático que puede conducir a la falla del embarazo.

Spano et al. 2000 La línea discontinua muestra el umbral clínico para la fragmentación del ADN espermático y las posibilidades de embarazo.

Algunos autores han publicado que las muestras de semen que contienen más del 27-30% de espermatozoides con fragmentación del ADN (% del Índice de Fragmentación del ADN) tienen entre 7 y 10 veces menos probabilidades de lograr el embarazo mediante relaciones sexuales o IIU, y alrededor de 1,5-2,0 veces menos probabilidades mediante FIV/ICSI.

Giwercman A et al. (2009 en imprenta, Int. J. Androl) incluyeron 137 hombres de parejas con infertilidad comprobada sin factores maternos conocidos y 137 hombres con fertilidad comprobada.

En hombres con parámetros de semen normales (concentración, movilidad y morfología del espermatozoide), el riesgo de infertilidad aumentó 5 veces con valores de Índice de fragmentación del ADN superioresal 20%.

Sin embargo, si alguno de los parámetros de semen era anormal, el riesgo de infertilidad se incrementó 16 veces incluso con valores de Índice de fragmentación de ADN superiores al 10%.

Los autores concluyeron que "el Índice de fragmentación del ADN es un factor predictor de la probabilidad de concepción natural, incluso cuando los parámetros seminales clásicos se encuentran dentro del rango normal. El análisis SCSA complementa la planificación del tratamiento para parejas con infertilidad comprobada"

La integridad del ADN espermático es continuamente desafiada por factores endógenos y exógenos, aunque varios mecanismos para reparar y proteger el ADN del daño están activos en las células humanas (Hoeijmakers, 2009). En particular, la preservación de la integridad del ADN tiene un papel importante en la transmisión del genoma a la próxima generación. En estas células, se inducen fisiológicamente rupturas de doble cadena del ADN durante la espermatogénesis y espermiogénesis para facilitar el entrecruzamiento meiótico y la sustitución de histonas-protaminas, respectivamente (Rathke et al., 2014). Además de este daño "fisiológico" del ADN, otros factores exógenos y endógenos pueden afectar la integridad del ADN durante la maduración/almacenamiento de los espermatozoides en el epidídimo (Moustafa et al., 2004; Ramos et al., 2004; Sakkas et al., 2002). Estudiar la integridad del ADN podría ser un paso fundamental en la evaluación de la competencia funcional del espermatozoide (Lewis et al., 2008). Por lo tanto, el análisis del daño del ADN espermático podría ser crucial tanto para el diagnóstico de la infertilidad como para predecir el éxito de la tecnología de reproducción asistida (ART, por sus siglas en inglés). En el contexto de la FIV, esta evaluación es de particular importancia ya que evita las barreras de selección natural de la concepción, aumentando la probabilidad de que los espermatozoides con un daño significativo del ADN transmitan las anomalías genéticas al recién nacido (Host et al., 2000). Por lo tanto, varios estudios han evaluado el papel predictivo del daño del ADN espermático para el resultado de la tecnología de reproducción asistida o la selección de espermatozoides.

El daño en el ADN del espermatozoide puede ser resultado de cinco mecanismos patogénicos diferentes (Perrin et al., 2011; Sakkas y Alvarez, 2010).

The El test SCSA® mide:

Índice de Fragmentación del ADN :
El Índice de Fragmentación del ADN es la medida de la fragmentación del ADN espermático y un indicador de la calidad del esperma.

Células con Alta Tinción del ADN: Porcentaje de espermatozoides con proteínas nucleares y estructuras de cromatina anormales (espermatozoides inmaduros).

La prueba SCSA® se realiza utilizando un dispositivo láser llamado citómetro de flujo que mide 250 espermatozoides por segundo. El resultado de la prueba se basa en la medición de aproximadamente 10.000 espermatozoides.

PRUEBA DE CRIBADO : Especialmente indicada para parejas con un ansiado deseo de tener hijos

INTENTOS INFRUCTUOSOS DE IIU/FIV/ICSI

ABORTOS ESPONTÁNEOS RECURRENTES

BAJA CALIDAD Y DESARROLLO EMBRIONARIO

INFERTILIDAD INEXPLICABLE: Parejas que desean tener hijos y han obtenido pruebas diagnósticas sin resultados significativos

HOMBRES PROPENSOS A UN ALTO ESTRÉS OXIDATIVO:

• >40 AÑOS
• ESTILO DE VIDA ESTRESANTE
• FUMADOR
• DIABÉTICO
• ENFERMEDADES CRÓNICAS

HOMBRES QUE REQUIEREN UNA EVALUACIÓN DE RIESGOS DETALLADA:

• EXPOSICIÓN A TOXINAS
• TOMA MEDICAMENTOS RECETADOS
• TRATAMIENTOS PREVIOS CONTRA EL CÁNCER

HOMBRES QUE DEBEN SOMETERSE A UN EXAMEN ANDROLÓGICO:

• RESULTADOS ANORMALES DEL ANÁLISIS GRÁFICO DE ESPERMA
• ENFERMEDADES ANDROLÓGICAS
• INFECCIONES UROGENITALES PREVIAS
• VARICOCELE (venas varicosas en el escroto)

La prueba SCSA® es realizada utilizando un dispositivo láser llamado citómetro de flujo. Básicamente, el citómetro de flujo mide 250 espermatozoides por segundo con alta precisión y proporciona un resultado estadísticamente sólido basado en datos de 2x 5000 espermatozoides por muestra. La precisión del citómetro de flujo combinada con la bioquímica precisa de la prueba SCSA permite mediciones altamente precisas de la integridad del ADN y de la cromatina del espermatozoide.

Las células se tiñen con un tinte fluorescente de ADN (naranja de acridina) y se fuerzan a través de un canal de vidrio en una suspensión líquida. Cuando las células pasan por el rayo láser, la luz láser hace que el tinte emita luz fluorescente de un color específico..

En la prueba SCSA®, debido a la naturaleza única del tinte naranja de acridina, los espermatozoides que emiten fluorescencia verde tienen niveles indetectables de ADN fragmentado, mientras que los espermatozoides que emiten fluorescencia de amarilla a roja tienen niveles moderados a altos de ADN fragmentado.

La fertilidad masculina se examina tradicionalmente mediante pruebas de esperma (espermiogramas) que registran la concentración, la motilidad y la morfología de los espermatozoides. Sin embargo, numerosos estudios en el último medio siglo demuestran claramente que estos parámetros no predicen el embarazo, ya que los hombres fértiles e infértiles tienen valores superpuestos (con la excepción de la azoospermia). Los espermiogramas clásicos son mediciones microscópicas de factores externos de los espermatozoides, mientras que la prueba SCSA mide factores internos del núcleo que no se pueden medir utilizando el microscopio óptico.

1. La extensión de las roturas de cadenas simples y dobles del ADN (Índice de fragmentación del ADN)
2. La extensión del intercambio de histonas somáticas nucleares por protaminas específicas del espermatozoide (Células con Alta Tinción del ADN)
3. Interpretación del primero y del segundo
4. Indicador de la salud general del hombre
5. Efectos de los agentes nocivos (dosis) en la fertilidad

La prueba SCSA es una prueba muy precisa que requiere un citómetro de flujo que es inaccesible para la mayoría de las clínicas de fertilidad debido a los altos costos de capital y personal capacitado. Por lo tanto, las muestras de semen recolectadas por usted o en el hogar del paciente pueden ser criopreservadas en su estado natural.

Puede informarnos por correo electrónico acerca del transporte deseado. Le enviaremos un contenedor preenfriado; las muestras de semen son almacenadas y enviadas de regreso a nuestro laboratorio.

El informe del SCSA estará disponible para usted a través de un sitio web seguro aproximadamente 4 días laborales después de que la muestra llegue a nuestro laboratorio.

Instrucciones para la recolección, procesamiento y envío de muestras de semen Recolección y procesamiento de las muestras:

Las muestras deben obtenerse después de un período de abstinencia de 24 a 48 horas, mediante masturbación en recipientes estériles de plástico para las muestras. Después de la licuefacción de la muestra, la concentración, la motilidad y la morfología del esperma son determinadas. Anote los parámetros en la carta de porte.

La concentración del esperma no debe ser inferior a 500,000/ml . De lo contrario, pueden producirse resultados inconclusos.

La criopreservación debe realizarse en un plazo máximo de 1 hora después de la entrega, ya que el Índice de fragmentación del ADN puede alterarse después de un período de espera más largo.

Criopreservación de las muestras:

Las muestras deben ser congeladas lo antes posible después de la licuefacción para minimizar la exposición al aire, que puede causar daños por especies reactivas de oxígeno.

Prepare 2 crioviales (tubos de 1-2 ml): Etiquételos con el nombre del paciente y la fecha de recolección de la muestra.

Congelación rápida:

Pipetee 0,25 ml o más del eyaculado nativo licuado en cada tubo criogénico.

¡No se requieren crioprotectores!

Coloque los tubos bien cerrados en posición vertical en el soporte de metal suministrado y coloque esto directamente en el recipiente criogénico preenfriado. El contenedor debe cerrarse rápidamente.

El contenedor se cierra con la abrazadera suministrada y se coloca en el recipiente de plástico, al que se adjunta la carta de porte para que sea claramente visible.

Nota: si la concentración de espermatozoides es suficiente, menos de 0,5 ml (dos alícuotas de 0,25 ml) de eyaculado puede ser suficiente para la prueba SCSA®. Para realizar la prueba, necesitamos dos alícuotas de 0,20 ml con una concentración > 0,5 m/ml.

Por favor, póngase en contacto con nuestro laboratorio si tiene alguna pregunta sobre el volumen requerido para una muestra de una concentración específica.

Envío de las muestras:

Enviamos un contenedorpreenfriado. Los contenedores almacenan nitrógeno líquido en una especie de "esponja" dentro del recipiente y así garantizan el transporte seguro de sus muestras criopreservadas en nitrógeno en fase gaseosa. La baja temperatura en el contenedor se puede mantener durante 7 días. Por lo tanto, es importante enviarlo de vuelta lo antes posible utilizando la etiqueta de envío proporcionada.

En el espacio entre el contenedor y la caja de envío hay un sobre con una abrazadera y un soporte para ampollas. También contiene una etiqueta de envío y una funda correspondiente quese debe atar al recipiente para el envío.

El interior del contenedor es muy frío (-196°C). Para evitar la congelación, debe usar guantes al tocar cualquier cosa que esté dentro del contenedor.

La prueba SCSA divide a los espermatozoides en cinco poblaciones:

El porcentaje de espermatozoides con cromatina inmadura. Los espermatozoides con Células con Alta Tinción del ADN presentan menos condensación de la cromatina, lo que resulta en una mayor tinción del ADN. Algunos estudios han demostrado que, si el porcentaje deCélulas con Alta Tinción del ADN es superior al 36%, no se ha producido ningún embarazo (Menezo).

Los valores del Índice de fragmentación del ADN se dividen en cuatro categorías estadísticas y pueden proporcionar las siguientes previsiones:

Índice de fragmentación del ADN<15% = resultados de embarazo muy buenos a buenos

Índice de fragmentación del ADN de > 15% a <25% = resultados de embarazo buenos a moderados

Índice de fragmentación del ADN de > 25% a <40% = resultados de embarazo moderados a malos

Índice de fragmentación del ADN40% = resultados muy malos de embarazo Todos los datos deben ser interpretados sin la influencia de factores maternos.

Además, el hallazgo muestra una representación gráfica del porcentaje del Índice de

Fragmentación del ADN y del porcentaje de Células con Alta Tinción del ADN.

El gráfico muestra que el 76% de los espermatozoides medidos no presentan fragmentación del ADN y el 24% restante presenta una fragmentación moderada-alta del ADN (Índice de fragmentación del ADN = 24%). Es posible concebir de forma natural o con la ayuda de una IIU.

Los datos actuales muestran que la probabilidad de un embarazo exitoso es significativamente menor cuando la proporción de espermatozoides con ADN fragmentado es > 25%. Sin embargo, un Índice de fragmentación del ADN> 25% no descarta el embarazo. El umbral de 25% es un umbral estadístico. Si un hombre tiene un Índice de fragmentación del ADNconstante >25%, se le incluye en un grupo estadístico que ha demostrado en ensayos clínicos que tarda más tiempo en lograr el embarazo natural y requiere más ciclos de FIV. Se asocia una tasa aumentada de abortos espontáneos con esto o el embarazo no se produce en absoluto.

Evaluación de la calidad del ADN espermático

Si el Índice de fragmentación del ADN ylasCélulas con Alta Tinción del ADN se encuentran dentro del rango normal, es posible el embarazo de manera natural o mediante inseminación (ignorando los factores de la pareja que influyen en la fertilidad). Esto significa que el ADN espermático muestra una alta estabilidad.

El Índice de fragmentación del ADN ha aumentado significativamente. Esto indica que el ADN espermático es muy frágil y tiende a la fragmentación del ADN.

La estabilización del ADN puede lograrse mediante:

• Intervención médica
• Cambios en el estilo de vida

En algunos casos, puede ser necesario cambiar de IIU a FIV/ICSI para aumentar las posibilidades de un resultado positivo en el embarazo.

El histograma muestra el DFI (índice de fragmentación del ADN) medido en una muestra de semen.

Los valores de DFI se clasifican en cuatro categorías estadísticas que permiten el siguiente pronóstico (sin tener en cuenta los factores de la pareja que afectan a la fertilidad):

< 15 % DFI = pronóstico de embarazo muy bueno a bueno

> 15 % a < 25 % DFI = pronóstico de embarazo bueno a moderado

> 25 % a < 40 % DFI = pronóstico de embarazo moderado a malo

> 40 % DFI = pronóstico de embarazo muy malo

Si el %DFI es superior al 25 %, la literatura actual recomienda:

• Mejorar la fragmentación del ADN mediante intervención médica
• Mejorar el DFI mediante cambios en el estilo de vida
• Pasar a FIV/ICSI para aumentar la probabilidad de un embarazo exitoso

Se cree que el óvulo es capaz de reparar ciertos niveles de daño en el ADN. Los niveles moderados a altos de fragmentación del ADN (Índice de fragmentación del ADN) encontrados en los espermatozoides con fluorescencia roja probablemente superan la capacidad de reparación del ADN del óvulo.

Marcos Mesequeret al. encontraron que, después de la recuperación de los óvulos, cada aumento del 10% en el Índice de fragmentación del ADN aumentó las probabilidades de no quedar embarazada en un factor de 1,31. En comparación, este efecto no se observó al utilizar óvulos de donantes, lo que indica una mayor capacidad de reparación con respecto a la fragmentación del ADN de los óvulos jóvenes.

Si el Índice de fragmentación del ADN es alto, se recomiend:

1. Derivar al paciente a un nutricionista.
2. Derivar al paciente a un andrólogo.
3. Examinar:
   • el estilo de vida
   • enfermedades crónicas
   • medicamentos que esté tomando
   • exposición a químicos, pesticidas, etc.

Si existe un factor de riesgo, se recomienda repetir la prueba de SCSA 3 meses después de la eliminación o corrección del factor de riesgo para evaluar su impacto.

Ejemplos:

Abstinencia de nicotina (84 días después):

Cirugía de varicocele (3 meses después):

Cese de la exposición a pesticidas (3 meses después):

• Prueba estándar de oro para la fragmentación del ADN
• Más de 25 años de experiencia
• Más de 40,000 muestras analizadas
• Extensa investigación en diferentes países
• La prueba más estandarizada
• Sin variabilidad entre laboratorios internacionales (objetivo)
• Resultados fiables y comparables
• 10.000 espermatozoides analizados por muestra, lo que proporciona una representación más precisa de la muestra de semen
• Se utiliza un tinte de molécula pequeña que tiene un mejor acceso a la cromatina del espermatozoide en comparación con otras pruebas que utilizan proteínas más grandes.
• La calidad de cada prueba es verificada interna y externamente
• Prueba estandarizada internacionalmente

El costo de la prueba es de €295. Actualmente no está cubierta por planes de salud.

El envío de sus muestras a nuestro laboratorio es gratuito.

Para valores de Índice de fragmentación del ADN >30%, le ofrecemos una segunda prueba de control gratuita, que normalmente debe realizarse 3 meses después de la primera prueba