Para médicos

O diagnóstico da infertilidade masculina é baseado na avaliação da análise convencional de sêmen, que se baseia nos critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS 6). No entanto, um número crescente de estudos tem destacado os problemas associados a essa metodologia devido à falta de valores de referência validados e preditivos para o sucesso da tecnologia de reprodução assistida (TRA) (van der Steeg et al., 2011; van Weert et al., 2008). A análise convencional de sêmen examina as características da função do espermatozoide, mas não aborda completamente a competência funcional do espermatozoide. A integridade do DNA é atualmente considerada fundamental para determinar a competência do espermatozoide. Novos testes para analisar a fragmentação do DNA do espermatozoide são fortemente defendidos (Shamsi et al., 2011).

A fragmentação do DNA do espermatozoide é uma das principais causas paternas de falha reprodutiva repetida. Cerca de 20-30% dos homens que frequentam uma clínica de fertilidade apresentam um nível de fragmentação do DNA do espermatozoide que pode levar à falha na gravidez..

Spano et al. 2000 A linha tracejada representa o limite clínico para a fragmentação do DNA do espermatozoide e as chances de gravidez.

Alguns autores publicaram que amostras de sêmen que contêm mais de 27-30% de espermatozoides com fragmentações do DNA (% Índice de Fragmentação do DNA) têm de 7 a 10 vezes menor chance de engravidar por meio de relação sexual ou IIU e uma chance 1,5 a 2,0 vezes menor por meio de FIV/ICSI.

Giwercman A et al. (2009, in press, J. Androl) incluíram 137 homens de casais com infertilidade comprovada sem fatores maternos conhecidos e 137 homens com fertilidade comprovada.

Em homens com parâmetros seminais normais (concentração, motilidade e morfologia dos espermatozoides), o risco de infertilidade aumentou 5 vezes com valores de Índice de fragmentação do DNA acima de 20%.

Entretanto, se qualquer um dos parâmetros seminais fosse anormal, o risco de infertilidade aumentava 16 vezes, mesmo com valores de Índice de fragmentação do DNA acima de 10%.

Os autores concluíram que "o Índice de fragmentação do DNA é um preditor da probabilidade de concepção natural, mesmo quando os parâmetros seminais clássicos estão dentro da faixa normal. A análise SCSA complementa o planejamento do tratamento para casais com infertilidade comprovada".

A integridade do DNA espermático é constantemente desafiada por fatores endógenos e exógenos, embora vários mecanismos de reparo e proteção do DNA contra danos estejam ativos nas células humanas (Hoeijmakers, 2009). Em particular, a preservação da integridade do DNA desempenha um papel fundamental na transmissão do genoma para a próxima geração. Nessas células, as quebras de dupla hélice do DNA são induzidas fisiologicamente durante a espermatogênese e a espermiogênese para facilitar o crossing-over meiótico e a substituição de histonas-protaminas, respectivamente (Rathke et al., 2014). Além desses danos "fisiológicos" ao DNA, outros fatores exógenos e endógenos podem afetar a integridade do DNA durante a maturação e o armazenamento dos espermatozoides no epidídimo (Moustafa et al., 2004; Ramos et al., 2004; Sakkas et al., 2002). O estudo da integridade do DNA pode ser um passo fundamental na avaliação da competência funcional dos espermatozoides (Lewis et al., 2008). Portanto, a análise do dano ao DNA espermático pode ser crucial tanto para o diagnóstico de infertilidade quanto para a previsão do sucesso de tecnologias de reprodução assistida. No contexto da FIV, essa avaliação é de particular importância, pois contorna as barreiras naturais de seleção da concepção, aumentando a probabilidade de que os espermatozoides com dano significativo ao DNA transmitam as aberrações genéticas ao recém-nascido (Host et al., 2000). Portanto, vários estudos avaliaram o papel preditivo do dano ao DNA espermático para o resultado das tecnologias de reprodução assistida ou da seleção de espermatozoides.

Os danos ao DNA do espermatozoide podem resultar de cinco mecanismos patogênicos diferentes (Perrin et al., 2011; Sakkas e Alvarez, 2010).

O teste SCSA® mede:

IFDNA (Índice de Fragmentação do DNA):
O Índice de Fragmentação do DNA (IFDNA) é a medida da fragmentação do DNA espermático e um indicador da qualidade do espermatozoide.

Células de Alta Coloração de DNA: Porcentagem de espermatozoides com proteínas nucleares anormais e estruturas de cromatina alteradas (espermatozoides imaturos).

O teste SCSA® é realizado usando um dispositivo a laser chamado citômetro de fluxo, que mede 250 espermatozoides por segundo. O resultado do teste é baseado na medição de cerca de 10.000 espermatozoides.

TESTE DE RASTREAMENTO: Especialmente indicado para casais com desejo de ter filhos há muito tempo e sem sucesso

TENTATIVAS MALSUCEDIDAS DE IIU/FIV/ICSI

ABORTOS ESPONTÂNEOS REPETIDOS

BAIXA QUALIDADE E DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO

INFERTILIDADE INEXPLICADA: Casais que desejam ter filhos e apresentam testes diagnósticos sem resultados significativos

HOMENS PROPENSOS A ALTO ESTRESSE OXIDATIVO:

• > 40 ANOS
• ESTILO DE VIDA ESTRESSANTE
• FUMANTE
• DIABÉTICO
• DOENÇAS CRÔNICAS

HOMENS QUE NECESSITAM DE UMA AVALIAÇÃO DE RISCO DETALHADA:

• EXPOSIÇÃO A TOXINAS
• USO DE MEDICAMENTOS PRESCRITOS
• TRATAMENTOS ANTERIORES CONTRA O CÂNCER

HOMENS QUE DEVEM PASSAR POR UMA AVALIAÇÃO ANDROLÓGICA:

• RESULTADOS ANORMAIS NO ESPERMOGRAMA
• DOENÇAS ANDROLÓGICAS
• INFECÇÕES UROGENITAIS ANTERIORES
• VARICOCELE (veias varicosas no escroto)

O teste SCSA® é realizado usando um dispositivo a laser chamado citômetro de fluxo. Basicamente, o citômetro de fluxo mede 250 espermatozoides/s com alta precisão e fornece um resultado estatisticamente sólido com base em dados de 2x 5000 espermatozoides por amostra. A precisão da citometria de fluxo associada à bioquímica precisa do teste SCSA permite medições altamente precisas da integridade do DNA e da cromatina do esperma.

As células são coradas com um corante de DNA fluorescente (laranja de acridina) e forçadas através de um canal de vidro em suspensão líquida. Quando as células passam pelo feixe de laser, a luz do laser faz com que o corante emita luz fluorescente de uma cor específica..

No teste SCSA®, devido à natureza única do corante Laranja de Acridina, os espermatozoides que emitem fluorescência verde têm níveis indetectáveis de DNA fragmentado, enquanto os espermatozoides que emitem uma fluorescência de amarela à vermelha têm níveis moderados a altos de DNA fragmentado.

Tradicionalmente, a fertilidade masculina é examinada por meio de testes de esperma (espermogramas) que registram a concentração, a motilidade e a morfologia dos espermatozoides. No entanto, numerosos estudos nas últimas cinco décadas demonstram claramente que esses parâmetros não são capazes de prever a gravidez, uma vez que os homens férteis e os inférteis apresentam valores sobrepostos (com exceção da azoospermia). Os espermogramas clássicos são medições microscópicas de fatores externos do esperma, enquanto o teste SCSA mede os fatores internos do núcleo que não podem ser medidos usando o microscópio óptico.

1. A extensão das quebras de fitas simples e duplas do DNA (Índice de fragmentação do DNA)
2. A extensão da troca de histonas somáticas nucleares por protaminas específicas do espermatozoide (Células de alta coloração de DNA)
3. Interpretação do 1º e do 2º
4. Indicador da saúde geral masculina
5. Efeitos dos agentes nocivos (dose) na fertilidade

O teste SCSA é altamente preciso, mas requer um citômetro de fluxo que é inacessível para a maioria das clínicas de fertilidade devido aos altos custos de capital e a necessidade de uma equipe treinada. Portanto, as amostras de sêmen coletadas por você ou por um paciente em casa podem ser criopreservadas de forma nativa.

Você pode nos informar por e-mail sobre o transporte desejado. Em seguida, enviaremos a você um recipiente seco pré-resfriado; as amostras de sêmen são armazenadas e enviadas de volta ao nosso laboratório.

O relatório SCSA estará disponível para você via um site seguro aproximadamente 4 dias úteis após a chegada da amostra ao nosso laboratório.

Instruções para coleta, processamento e envio das amostras de sêmen:

Coleta e processamento das amostras:

A coleta deve ser realizada após 24-48 horas de abstinência, por meio de masturbação em recipientes estéreis de plástico para amostras. Após a liquefação da amostra, a concentração, a motilidade e a morfologia dos espermatozoides são determinadas. Anote os parâmetros no documento de envio.

A concentração dos espermatozoides não deve cair abaixo de 500.000/ml . Caso contrário, podem ocorrer resultados inconclusivos.

A criopreservação deve ocorrer no máximo 1 hora após a entrega , pois o Índice de fragmentação do DNA pode ser alterado após um período de espera mais longo.

Criopreservação das amostras:

As amostras devem ser congeladas o mais rápido possível após a liquefação para minimizar a exposição ao ar, que pode causar danos causados por espécies reativas de oxigênio.

Prepare 2 criotubos (tubos de 1-2 ml): rotule com o nome do paciente e a data da coleta da amostra.

Congelamento rápido :

Pipetar 0,25 ml ou mais do ejaculado nativo liquefeito em cada criotubo.

Não é necessário usar crioprotetores!

Coloque os frascos bem fechados em posição vertical no suporte de metal fornecido e coloque-os diretamente no recipiente criogênico pré-resfriado. O recipiente deve ser fechado rapidamente.

O recipiente é fechado com o lacre fornecido e colocado no recipiente de plástico, ao qual é anexada a nota de envio para que fique claramente visível.

Observação: se a concentração de espermatozoides for suficiente, menos de 0,5 ml (duas alíquotas de 0,25 ml) de ejaculado podem ser suficientes para o teste SCSA®. Para realizar o teste, precisamos de duas alíquotas de 0,20 ml com concentração >0,5M/ml.

Entre em contato com nosso laboratório se tiver alguma dúvida sobre o volume necessário de uma amostra com uma concentração específica.

Envio das amostras:

Nós enviamos um recipiente pré-resfriado. O recipiente armazena o nitrogênio líquido em uma espécie de "esponja" dentro do recipiente, garantindo assim o transporte seguro de suas amostras criopreservadas na fase gasosa de nitrogênio. A baixa temperatura no recipiente pode ser mantida por até 7 dias. Portanto, é importante enviá-lo de volta o mais rápido possível, usando a etiqueta de envio fornecida.

Entre o recipiente e a caixa de envio, há um envelope contendo um lacre e um suporte para ampolas. Também contém uma etiqueta de envio e uma manga correspondente que deve ser anexada ao recipiente para o envio de devolução.

O interior do recipiente é extremamente frio (-196°C). Para evitar queimaduras de gelo, é necessário utilizar luvas ao tocar em qualquer objeto presente no interior do recipiente.

O teste SCSA divide os espermatozoides em cinco populações:

Porcentagem de espermatozoides com cromatina imatura. Os espermatozoides de Células de alta coloração de DNA apresentam menor condensação de cromatina, resultando em maior corante de marcação de DNA. Alguns estudos têm demonstrado que, se a porcentagem de Células de alta coloração de DNA for superior a 36%, nenhuma gravidez ocorreu (Menezo).

Os valores de Índice de fragmentação do DNA (IFDNA) são divididos em quatro categorias estatísticas e podem fornecer as seguintes previsões:

< 15% IFDNA = resultados de gravidez de muito bons a bons

IFDNA de > 15% a < 25% = resultados de gravidez de bons a moderados

IFDNA de > 25% a < 40% = resultados de gravidez de moderados a ruins

IFDNA 40% = resultados de gravidez muito ruins

Todos os dados devem ser compreendidos sem fatores de influência materna.

Além disso, a descoberta mostra uma representação gráfica da porcentagem do Índice de Fragmentação do DNA e da porcentagem de Células de alta coloração de DNA.

O gráfico mostra que 76% dos espermatozoides medidos não apresentam fragmentação do DNA e 24% apresentam fragmentação do DNA de moderada à alta (Índice de fragmentação do DNA = 24%). É possível conceber naturalmente ou com a ajuda de uma inseminação intrauterina (IIU).

Os dados atuais mostram que a probabilidade de uma gravidez bem-sucedida é significativamente menor quando a proporção de espermatozoides com DNA fragmentado é >25%. No entanto, um Índice de fragmentação do DNA >25% não descarta a gravidez. O limite de 25% é um limite estatístico. Se um homem tem um Índice de fragmentação do DNA constante de >25%, ele é colocado em um grupo estatístico que tem mostrado em testes clínicos que leva mais tempo para alcançar a gravidez naturalmente e requer mais ciclos de fertilização in vitro (FIV). Uma taxa aumentada de abortos espontâneos está associada a isso ou a gravidez não ocorre de forma alguma.

Avaliando a qualidade do DNA do espermatozoide

Se o Índice de fragmentação do DNA e as Células de alta coloração de DNA estão dentro da faixa normal, a gravidez é possível naturalmente ou por inseminação (ignorando fatores do parceiro que afetam a fertilidade).

Isso significa que o DNA do espermatozoide apresenta uma alta estabilidade.

O Índice de fragmentação do DNA está significativamente aumentado. Isso significa que o DNA do espermatozoide é muito frágil e tende à fragmentação do DNA.

A estabilização do DNA pode ser alcançada por meio de:

• Intervenção médica
• Mudança de estilo de vida

Em alguns casos, pode ser necessário mudar de IIU para FIV/ICSI para aumentar as chances de um resultado positivo de gravidez.

O histograma mostra o DFI (índice de fragmentação do DNA) medido em uma amostra de sêmen.

Os valores de DFI são classificados em quatro categorias estatísticas que permitem o seguinte prognóstico (sem considerar fatores da parceira que afetam a fertilidade):

< 15 % DFI = prognóstico de gravidez muito bom a bom

> 15 % a < 25 % DFI = prognóstico de gravidez bom a moderado

> 25 % a < 40 % DFI = prognóstico de gravidez moderado a ruim

> 40 % DFI = prognóstico de gravidez muito ruim

Se o %DFI estiver acima de 25 %, a literatura atual recomenda:

• Melhorar a fragmentação do DNA por meio de intervenção médica
• Melhorar o DFI com mudanças no estilo de vida
• Passar para FIV/ICSI para aumentar a probabilidade de uma gravidez bem-sucedida

Acredita-se que o óvulo seja capaz de reparar certos níveis de danos no DNA.

No entanto, os níveis de moderados a altos de fragmentação do DNA (Índice de fragmentação do DNA) encontrados nos espermatozoides fluorescentes vermelhos provavelmente excedem a capacidade de reparação do DNA do óvulo.

Marcos Mesequer et al. descobriram que após a recuperação do óvulo, cada aumento de 10% no Índice de fragmentação do DNA aumentou em 1,31 vezes as chances de não engravidar. Em comparação, esse efeito não foi observado quando se utilizou óvulos doados, o que indica uma maior capacidade de reparação com relação à fragmentação do DNA de óvulos jovens.

Se o Índice de fragmentação do DNA for alto, recomendamos:

1. Encaminhamento a um nutricionista
2. Encaminhamento a um andrologista
3. Examinar:
   • estilo de vida
   • doenças crônicas
   • uso de medicamentos
   • exposição a produtos químicos, pesticidas, etc.

Se houver um fator de risco, é recomendado repetir o teste SCSA 3 meses após a remoção/correção do fator de risco para avaliar o impacto.

Exemplos:

Abstinência de nicotina (84 dias depois):

Cirurgia de varicocele (3 meses depois):

Cessação da exposição a pesticidas (3 meses depois):

• Teste padrão-ouro para a fragmentação do DNA espermático
• Mais de 25 anos de experiência
• Mais de 40.000 amostras analisadas
• Extensas pesquisas em diferentes países
• O teste mais padronizado
• Não há variabilidade entre laboratórios internacionais (objetivo)
• Resultados sólidos e comparáveis
• 10.000 espermatozoides analisados por amostra - representação mais precisa da amostra de sêmen
• Uso de uma tintura de pequenas moléculas que apresenta melhor acesso à cromatina espermática em comparação com outros testes que utilizam proteínas maiores.
• A qualidade de cada teste é verificada interna e externamente
• Teste padronizado internacionalmente

O custo do teste é de €295. Atualmente, não é coberto pelos planos de saúde.

O envio das amostras ao nosso laboratório é gratuito.

Para valores de Índice de fragmentação do DNA >30%, oferecemos um segundo teste de controle gratuito, que normalmente deve ser realizado 3 meses após o primeiro teste.