Pour les médecins

Le diagnostic de l’infertilité masculine est basé sur l’évaluation de l’analyse conventionnelle du sperme, qui est basée sur les critères de l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS 6). Cependant, un nombre croissant d’études a mis en évidence les problèmes associés à cette méthodologie en raison du manque de seuils de paramètres spermatiques prédictifs et validés pour le succès de la procréation médicalement assistée (PMA). (van der Steeg et al., 2011; van Weert et al., 2008). L’analyse conventionnelle du sperme examine les caractéristiques de la fonction spermatique, mais ne prend pas pleinement en compte la compétence fonctionnelle du spermatozoïde. Le rôle fondamental dans la détermination de la compétence des spermatozoïdes est actuellement attribué à l’intégrité de l’ADN. Des nouveaux tests pour analyser la fragmentation de l’ADN spermatique sont fortement recommandés. (Shamsi et al., 2011).

La fragmentation de l’ADN spermatique est l’une des causes paternelles les plus importantes d’échecs reproductifs répétés. Environ 20-30% des hommes qui consultent une clinique de fertilité ont un niveau de la fragmentation de l’ADN spermatique qui peut conduire des échecs de grossesse.

Spano et al. 2000 La ligne en pointillé montre le seuil clinique de la fragmentation de l’ADN spermatique et les chances de grossesse.

Certains auteurs ont publié que les échantillons de sperme contenant plus de 27-30% de spermatozoïdes avec des fragmentations de l’ADN (% de l’Indice de Fragmentation de l’ADN) ont 7 à 10 fois moins de chances de tomber enceintes par rapport sexuels ou IIU, et environ 1.5 à 2 fois moins de chances à travers FIV/ICSI.

Giwercman A et al. (2009 sous presse, Int. J. Androl) ont inclus 137 hommes de couples ayant une infertilité prouvée sans facteurs maternels connus et 137 hommes ayant une fertilité prouvée.

Dans les hommes avec des paramètres normaux du sperme (concentration, mobilité et morphologie du sperme), le risque d’infertilité a augmenté 5 fois avec des valeurs de l’Indice de fragmentation de l’ADN supérieures à 20%.

Cependant, si l’un des paramètres était anormal, le risque d’infertilité a augmenté 16 fois même avec des valeurs de l’Indice de fragmentation de l’ADN supérieures à 10%.

Les auteurs ont conclu que "l’Indice de fragmentation de l’ADN est un prédicteur de la probabilité de conception naturelle, même lorsque les paramètres spermatiques classiques se situent dans la plage normale. L'analyse SCSA complète la planification du traitement pour les couples présentant une infertilité prouvée."

L'intégrité de l’ADN spermatique est continuellement mise à l’épreuve par des facteurs endogènes et exogènes, bien que divers mécanismes de réparation et de protection de l’ADN contre des dommages soient actifs dans les cellules humaines (Hoeijmakers, 2009). En particulier, la préservation de l’intégrité de l’ADN a un rôle majeur dans la transmission du génome à la prochaine génération. Dans ces cellules, les cassures double-brin de l’ADN sont induit physiologiquement pendant la spermatogenèse et la spermiogenèse pour faciliter le croisement méiotique et la substitution d’histone-protamine, respectivement (Rathke et al., 2014). Outre ces dommages "physiologiques" à l’ADN, d’autres facteurs exogènes et endogènes peuvent affecter l’intégrité de l’ADN lors de la maturation/stockage du sperme dans l’épididyme (Moustafa et al., 2004 ; Ramos et al., 2004 ; Sakkas et al., 2002). L’étude de l’intégrité de l’ADN pourrait être une étape fondamentale dans l’évaluation de la compétence fonctionnelle des spermatozoïdes (Lewis et al., 2008). Par conséquent, l’analyse des dommages à l’ADN spermatique pourrait être crucial pour diagnostiquer l’infertilité et prédire le succès de l’Assistance médicale à la procréation. Dans le contexte de FIV, cette évaluation est d’importance particulière, car elle contourne les barrières de sélection naturelle de la conception, augmentant la probabilité que les spermatozoïdes présentant des dommages importants à l’ADN transmettent des aberrations génétiques au nouveau-né (Host et al., 2000). Par conséquent, plusieurs études ont évalué le rôle prédictif des dommages à l’ADN des spermatozoïdes pour le résultat de l’Assistance médicale à la procréation ou la sélection des spermatozoïdes.

Le dommage à l’ADN spermatique peut résulter de cinq mécanismes pathogènes différents (Perrin et al., 2011 ; Sakkas et Alvarez, 2010).

Le test SCSA® mesure:

L’Indice de Fragmentation de l’ADN:
L’Indice de fragmentation de l’ADN (%) est la mesure de la fragmentation de l’ADN spermatique et un indicateur de la qualité spermatique.

Cellules à forte colorations de l’ADN : Le pourcentage de spermatozoïdes présentant de protéines centrales et des structures de chromatine anormales (des spermatozoïdes immatures)

Le test SCSA® est effectué à l’aide d’un dispositif laser appelé cytomètre en flux qui mesure 250 spermatozoïdes/seconde. Le résultat de test est basé sur la mesure d’environ 10,000 spermatozoïdes.

TEST DE DEPISTAGE : Particulièrement indiqué pour les couples avec un désir tant attendu d’avoir des enfants

TENTATIVES ECHOUEES D’IIU/FIV/ICSI

FAUSSES COUCHES RÉPÉTÉS

FAIBLE DÉVELOPPEMENT ET QUALITÉ EMBRYONNAIRE

STÉRILITÉ INEXPLIQUÉE: Des couples qui veulent avoir des enfants et ont des tests de diagnostics sans rien de remarquable

DES HOMMES SUJETS À UN STRESS OXYDATIVE ELEVE :

• > 40 ANS
• MODE DE VIE STRESSANT
• FUMEUR
• DIABÉTIQUE
• MALADIES CHRONIQUES

DES HOMMES NÉCESSITANT D’UNE ÉVALUATION DE RISQUE DÉTAILLÉE :

• EXPOSITIONS AUX TOXINES
• PRISE DES MÉDICAMENTS SUR ORDONNANCE
• TRAITEMENTS ANTÉRIEURS CONTRE LE CANCER

DES HOMMES QUI DEVRAIENT SUBIR UN EXAMEN ANDROLOGIQUE :

• RÉSULTATS ANORMAUX DE L’ANALYSE GRAPHIQUE DU SPERMATOZOÏDE
• LES MALADIES ANDROLOGIQUES
• ANTÉCÉDENTS D’INFECTIONS UROGÉNITALES
• VARICOCÈLE (veines variqueuses dans le scrotum)

Le test SCSA® est effectué à l’aide d’un dispositif laser appelé cytomètre en flux. Essentiellement, le cytomètre en flux mesure 250 spermatozoïdes/seconde avec une grande précision et fournit un résultat statiquement robuste basé sur des données de 2x 5000 spermatozoïdes par échantillon. La précision de cytomètre en flux couplée à la biochimie précise du test SCSA permet des mesures très précises de la chromatine du sperme et de l’intégrité de l’ADN.

Les cellules sont colorées avec un colorant fluorescent de l’ADN (acridine orange) et forcées à traverser un canal en verre dans une suspension liquide. Lorsque les cellules traversent le faisceau laser, la lumière du laser amène le colorant à émettre une lumière fluorescente d’une couleur spécifique. .

Dans le test SCSA®, en raison de la nature unique du colorant Acridine Orange, les spermatozoïdes qui émettent une fluorescence verte ont des niveaux indétectables d’ADN fragmenté, tandis que les spermatozoïdes qui émettent une fluorescence du jaune au rouge ont des niveaux modérés à élevés d’ADN fragmenté.

La fertilité masculine est traditionnellement examinée en utilisant de tests de sperme (spermogramme) qui registrent la concentration, la mobilité et la morphologie des spermatozoïdes. Cependant, de nombreuses études au cours de dernier demi-siècle montrent clairement que ces paramètres ne prédisent pas la grossesse, car des hommes fertiles et infertiles ont des valeurs qui se chevauchent (à l’exception de l’azoospermie). Les spermogrammes classiques sont des mesures en microscopie des facteurs externes des spermatozoïdes, tandis que le test SCSA mesure les facteurs internes du noyau qui ne peuvent pas être mesurés en utilisant un microscope optique.

1. L’ampleur des cassures de brins d’ADN simple et double (l’Indice de fragmentation de l’ADN)
2. L’ampleur de l’échange d’histones somatiques nucléaires pour les protamines spécifiques du sperme (Cellules à forte colorations de l’ADN)
3. Interprétation du 1er et 2ème
4. Indicateur de la santé masculine générale
5. Des effets des agents nocifs (dose) sur la fertilité

Le test SCSA est un test très précis qui nécessite d’un cytomètre en flux inaccessible à la plupart des cliniques de fertilité en raison des coûts d’investissements élevés et d’un personnel qualifié.

Par conséquent, les échantillons de sperme prélevés chez vous ou au domicile du patient peuvent être cryoconservés de manière native.

Vous pouvez nous informer par e-mail sur un transport souhaité. Nous vous enverrons ensuite un récipient pré-refroidi ; les échantillons de sperme sont stockés et renvoyés à notre laboratoire.

Le rapport SCSA sera à votre disposition via un site web sécurisé environ 4 jours ouvrables après l’arrivée de l’échantillon à notre laboratoire.

Les instructions pour la collecte, le traitement et l’envoi des échantillons de sperme

Collecte et traitement des échantillons :

Il devrait être obtenu après 24-48 heures d’abstinence en se masturbant dans des récipients à échantillons en plastique stériles. Après la liquéfaction de l’échantillon, la concentration, la mobilité et la morphologie des spermatozoïdes sont déterminées. Notez les paramètres sur la lettre de voiture.

La concentration de sperme ne doit pas tomber en dessous de 500,000/ml. Sinon, des résultats non concluants peuvent survenir.

La cryoconservation devrait avoir lieu au plus tard 1 heure après la livraison, car l’Indice de fragmentation de l’ADN peut être falsifié après une période d’attente plus longue.

La cryoconservation des échantillons :

Les échantillons doivent être congelés le plus tôt possible après la liquéfaction afin de minimiser l’exposition à l’air, qui peut causer des dommages causés par les espèces réactives d’oxygène.

Préparez 2 cryotubes (flacons de 1-2ml) : L’étiquette avec le nom du patient et la date de la collecte d’échantillon.

Congélation instantanée :

Pipette 0.25ml ou plus de l’éjaculat natif liquéfié dans chaque cryotube.

Des cryoprotecteurs ne sont pas nécessaires !

Placez les flacons bien fermés en position verticale dans le support métallique et places-le directement dans le récipient cryogénique pré-refroidi. Le récipient doit être fermé rapidement.

Le récipient est fermé avec l’attache de câble fourni et placé dans le récipient en plastique, auquel le bordereau d’expédition est attaché afin qu’il soit clairement visible.

Remarque : Si la concentration de sperme est suffisante, moins de 0.5 ml (deux parties aliquotes de 0.25 ml) d’éjaculation doit être suffisant pour le test SCSA®. Pour réaliser le test nous avons besoin de deux parties aliquotes de 0.20ml avec une concentration >0.5m/ml.

S’il vous plaît, contactez notre laboratoire si vous avez des questions sur le volume requis d’un échantillon d’une concentration spécifique.

Envoi des échantillons :

Nous expédions un récipient pré-réfrigéré. Les récipients stockent l’azote liquide dans une sorte "d’éponge" à l’intérieur du récipient et assurent la sécurité du transport de vos échantillons cryoconservés en azote en phase gazeuse. La basse température dans le récipient peut être maintenue pendant 7 jours. Il est donc important de le renvoyer le plus tôt possible en utilisant l’étiquette d’expédition fournis.

Dans l’espace entre le récipient et la boîte d’expédition il y a une enveloppe avec un attache de câble et un support d’ampoule. Il contient également une étiquette d’expédition et un manchon correspondant qui doivent être attachés au récipient pour l’expédition de retour.

Il fait très froid (-196°C) à l’intérieur du récipient. À fin d’éviter les engelures, vous devez porter des gants lorsque vous touchez tout ce qui se trouve dans le récipient.

Le test SCSA divise les spermatozoïdes en cinq populations :

Le pourcentage de spermatozoïdes avec chromatine immature. Les spermatozoïdes de Cellules à forte colorations de l’ADN présentent moins de condensation de la chromatine, en augmentant la capacité de coloration de l’ADN. Certaines études ont montré que si le pourcentage de Cellules à forte colorations de l’ADN est supérieur à 36%, aucune grossesse est survenue (Menezo).

Les valeurs de l’Indice de fragmentation de l’ADN sont divisées en quatre catégories statistiques et peuvent fournir les prévisions suivantes :

Indice de fragmentation de l’ADN < 15% = des résultats de grossesse de très bons à bons

Indice de fragmentation de l’ADN de > 15% à < 25% = des résultats de grossesse de bons à modérés.

Indice de fragmentation de l’ADN de > 25% à < 40% = des résultats de grossesse de modérés à pauvre

Indice de fragmentation de l’ADN 40% = des résultats de grossesse très mauvais

Toutes les données doivent être compris sans l’influence de facteurs maternelles.

De plus, le résultat montre une représentation graphique du pourcentage d’Indice de fragmentation de l’ADN et le pourcentage de Cellules à forte colorations de l’ADN.

Le graphique montre que 76% des spermatozoïdes mesurés ne montrent aucune fragmentation de l’ADN et 24% montrent une fragmentation de l’ADN de modérée à élevée (l’Indice de fragmentation de l’ADN = 24%). Il est possible de concevoir naturellement ou à l’aide d’une IIU.

Les données actuelles montrent que la probabilité d’une grossesse réussie est significativement plus baisse lorsque la proportion des spermatozoïdes avec de l’ADN fragmenté est > 25%. Cependant, un Indice de fragmentation de l’ADN > 25% n’exclut pas la possibilité de grossesse. Le seuil de 25% est un seuil statistique. Si un homme présente un Indice de fragmentation de l’ADN constant de > 25%, il est placé dans un groupe statistique qui a montré dans des essais cliniques qu’il met plus de temps à atteindre une grossesse naturelle et plus de cycles de FIV. Un taux accru des fausses couches est associé à cela ou la grossesse ne se produira pas du tout.

Évaluation de la qualité de l’ADN spermatique

Étant donné que l’Indice de fragmentation de l’ADN et les Cellules à forte colorations de l’ADN sont dans la plage normale, la grossesse est possible naturellement ou par insémination (en ignorant les facteurs du partenaire qui affectent la fertilité)Cela signifie que l’ADN spermatique présente une stabilité élevée

L’Indice de fragmentation de l’ADN est fortement augmenté. Cela signifie que l’ADN spermatique est très fragile et tends vers la fragmentation de l’ADN.

La stabilisation de l’ADN peut être obtenue par :

• Intervention médicale
• Un changement de mode de vie

Il peut être nécessaire de passer de l’IIU à la FIV/ICSI pour augmenter les chances d’un résultat positif de grossesse

L’histogramme montre le DFI (indice de fragmentation de l’ADN) mesuré dans un échantillon de sperme.

Les valeurs de DFI sont classées en quatre catégories statistiques permettant le pronostic suivant (sans tenir compte des facteurs de la partenaire influençant la fertilité) :

< 15 % DFI = pronostic de grossesse très bon à bon

> 15 % à < 25 % DFI = pronostic de grossesse bon à modéré

> 25 % à < 40 % DFI = pronostic de grossesse modéré à mauvais

> 40 % DFI = pronostic de grossesse très mauvais

Si le %DFI dépasse 25 %, la littérature actuelle recommande :

• Améliorer la fragmentation de l’ADN par une intervention médicale
• Améliorer le DFI par des changements de mode de vie
• Passer à la FIV/ICSI pour augmenter les chances de grossesse

On croit que l’ovule est capable de réparer certains niveaux de dommages de l’ADN. Les niveaux modérés à élevés de la fragmentation de l’ADN trouvés dans le spermatozoïde fluorescent rouge dépassent probablement la capacité de réparation de l’ADN de l’ovule.

Marcos Mesequer et al. ont découvert qu’après le prélèvement de l’ovule, chaque augmentation de 10% de l’Indice de fragmentation de l’ADN a augmenté la probabilité de ne pas tomber enceinte d’un facteur de 1.31. En comparaison, cet effet n’a pas été observé lors de l’utilisation d’ovocytes de donneurs, ce qui indique une capacité de réparation plus élevée en ce qui concerne la fragmentation de l’ADN des ovocytes jeunes.

Si l’Indice de fragmentation est élevé, nous recommandons :

1. Orientation vers un nutritionniste
2. Orientation vers un andrologue
3. Examiner :
   • mode de vie
   • maladies chroniques
   • prise des médicaments
   • exposition aux produits chimiques, pesticides, etc.

S’il y a un facteur de risque, répéter le test SCSA est recommandé 3 mois après la suppression/correction du facteur de risque pour évaluer l’impact.

Exemples :

L’abstinence de nicotine (84 jours après) :

La chirurgie de varicocèle (3 mois après) :

Arrêt de l’exposition aux pesticides (3 mois après) :

• Test de référence pour la fragmentation de l’ADN spermatique
• Plus de 25 ans d’expérience
• Plus de 40,000 échantillons analysés
• Des recherches approfondies dans différents pays
• Le test le plus standardisé
• Pas de variabilité entre les laboratoires internationaux (objectif)
• Des résultats fiables et comparables
• 10,000 spermatozoïdes analysés par échantillon – représentation plus précise de l’échantillon de sperme
• L’utilisation d’un colorant de petite molécule de qui a un meilleur accès à la chromatine des spermatozoïdes par rapport d’autres tests qui travaillent avec des protéines plus grandes.
• Chaque test est soumis à un contrôle de qualité interne et externe
• Test standardisé internationalement

Le coût de test est de €295. Il n’est actuellement pas couvert par les plans de santé.

L’envoi de vos échantillons à notre laboratoire est gratuit.

Pour les valeurs de l’Indice de fragmentation >30%, nous vous offrons un deuxième test de contrôle gratuit, qui devrait normalement avoir lieu 3 mois après le premier test.